菌種保存甘油濃度

純甘油高壓滅菌后分裝-20℃保存待用；離心管單獨滅菌；我們保存菌種時取800微升的菌液置于離心管中，再取分裝好的純甘油200微升與菌液混合，劇烈震蕩，充分混勻，置-20℃或-80℃保存均可。

菌種保存方法

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保存方法：一般的非高溫菌種簡單的保存方法，就是可以保存在2-4℃，避光的環(huán)境條件下可以較長時間的保存。~

菌種保存的原理和方法

找了半天~~~給個最佳唄1、低溫定期移植保藏法。將需要保藏的菌種接種在適宜的斜面培養(yǎng)基上，適溫培養(yǎng)，當(dāng)菌絲健壯地長滿斜面時取出，放在3-5℃低溫干燥處或4℃冰箱、冰柜中保藏，每隔4-6個月時間移植轉(zhuǎn)管一次，具體應(yīng)根據(jù)菌種特性決定。保藏時要注意環(huán)境溫度不能太高，以防霉菌通過棉塞進(jìn)入管內(nèi)。因此，若用棉塞，可用干凈的硫酸紙或牛皮紙包扎棉塞，即可減少污染的機會，也可防止培養(yǎng)基干燥。除草菇菌種外，其他食用菌菌種都能采用此法保藏。2、液體石蠟保藏法。取化學(xué)純液體石蠟(要求不含水分、不霉變)裝于三角瓶中加棉塞并包紙，在1公斤/平方厘米壓力下滅菌1小時，再放入40℃恒溫箱中數(shù)天，以蒸發(fā)其中水分，至石蠟油完全透明為止。將處理好的石蠟油移接在空白斜面上，28-30℃下培養(yǎng)2-3天，證明無雜菌生長方可使用。然后用無菌操作的方法把液體石蠟注入待保藏的斜面試管中。注入量以高出培養(yǎng)基斜面1-1.5厘米，塞上橡皮塞，用固體石蠟封口，直立于低溫干燥處保藏。保藏時間在一年以上，在低溫下，保藏時間還可延長。3、沙土管保藏法。取河沙用水浸泡洗滌數(shù)次，過60目篩除去粗粒，再用10%鹽酸浸泡2-4小時，除去其中有機物質(zhì)，再用水沖洗至流水的ph達(dá)到中性，烘干備用。同時取貧脊土或菜園土用水浸泡，使呈中性，沉淀后棄去上清液，烘干碾細(xì)，用100目篩子過篩，將處理好的沙與土以(2-4):1混勻，用磁鐵吸出其中的鐵質(zhì)，然后分裝小試管或安瓿內(nèi)，每管裝量0.5-2克，塞棉塞，用紙包扎滅菌(1.5公斤/平方厘米，1小時)，再干熱滅菌(160℃，2-3小時)1-2次，進(jìn)行無菌檢驗，合格后使用。將已形成孢子的斜面菌種，在無菌條件下注入無菌水3-5毫升，刮菌苔，制成菌懸液，再用無菌吸管吸取菌液滴入砂土管中，以浸透砂土為止。將接種后的沙土管放入盛有干燥劑的真空干燥器內(nèi)，接上真空泵抽氣數(shù)小時，至沙土干燥為止。真空干燥操作需在孢子接入后48小時內(nèi)完成，以免孢子發(fā)芽。制備好的沙土管用石蠟封口，在低溫下可保藏2-10年。4、濾紙片保藏法。取白色(收集深色孢子)或黑色(收集白色孢子)濾紙，剪成4×0.8厘米的小紙條，平鋪在培養(yǎng)皿中用紙包裹進(jìn)行滅菌(1公斤/平方厘米，30分鐘)。采用鉤懸法收集孢子，讓孢子落在濾紙條上。將載有孢子的濾紙條放入保藏試管中，再將保藏試管放入干燥器中1-2天，除去濾紙水分，使濾紙水分含量達(dá)2%左右，然后低溫保藏。5、自然基質(zhì)保藏法⑴麥粒保藏法：取無癟粒、無雜質(zhì)的小麥淘洗干凈，浸泡12-15小時，加水煮沸15分鐘，繼續(xù)熱浸15分鐘，使麥粒脹而不破，瀝干水分?jǐn)傞_晾曬，使麥粒的含水量在25%左右。將碳酸鈣、石膏拌入熟麥粒中(麥粒、碳酸鈣、石膏比例為10公斤:133克:33克)，拌和均勻后裝入試管中，每管約2-3克，然后清洗試管，塞棉塞，滅菌1.5(1.5公斤/平方厘米，2小時)，經(jīng)無菌檢查合格后備用，試管基質(zhì)冷卻后接種，適溫培養(yǎng)，待菌絲長滿基質(zhì)后用石蠟涂封棉塞，放低溫保藏。2年左右轉(zhuǎn)接一次。⑵麩曲保藏法。取新鮮麩皮，過60目篩除去粗粒。將麩皮和自來水按1:1拌勻，裝入小試管，每管約裝1/3高度，加棉塞用紙包扎，高壓滅菌(1.5公斤/平方厘米，30分鐘)，經(jīng)無菌檢查合格后備用，將生長在斜面培養(yǎng)基上的健壯菌種，移種至無菌麩曲管中，移種時注意盡管搗勻小試管中的麩皮，呈疏松狀態(tài)，在適溫下培養(yǎng)至菌絲長滿麩皮為止，將麩曲小管置干燥器中，在低溫或適溫下保藏。6、生理鹽水保藏法。取純氯化鈉0.7-0.9克，放入100%毫升蒸餾水中，攪拌均勻分裝試管，每管5-10毫升，進(jìn)行滅菌(1公斤/平方厘米，30分鐘)，經(jīng)無菌檢查合格后備用，將待保藏的菌種接入馬鈴薯葡萄糖液體培養(yǎng)基中適溫振蕩培養(yǎng)5-7天。無菌操作吸取少許培養(yǎng)菌種注入經(jīng)檢驗合格的生理鹽水試管中，塞上無菌橡皮塞，用石蠟涂封，在室溫或低溫保藏。7、冷凍真空干燥法。將已培養(yǎng)、生長豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的血清、卵白、脫脂奶制成菌懸液，將懸液以無菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中，每管約0.3-0.5毫升，然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接，安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍，并在冷凍狀態(tài)下抽空干燥，并在真空狀態(tài)下熔封安瓿，在-20℃保存，一般可保存十年以上，但成本較高。8、液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的菌種制成菌懸液備用；其次，準(zhǔn)備安瓿瓶，每瓶加入0.8毫升冷凍保護(hù)劑10%(體積比)甘油蒸餾水溶液，塞棉塞滅菌(1公斤/平方厘米，5分鐘)。無菌檢查后，接入要保藏的菌種，火焰熔封瓶口，檢查是否漏氣，將封好口的安瓿瓶放在凍結(jié)器內(nèi)，以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫，使保藏品逐步均勻地凍結(jié)，直至-35℃，以后凍結(jié)速度就不需控制，安瓿凍結(jié)后立即放入液氮罐內(nèi)，在-150至-196℃保藏，該法只有少數(shù)科研院所使用。

菌種保存條件

D

菌種保存原理

請教各位，菌種保存的操作步驟。

我的載體已經(jīng)構(gòu)建成功，現(xiàn)在要做下一步，但是要很長時間。所以必須要保存菌液。是不是拿已經(jīng)測序剩下的菌液劃板，然后挑單菌接種到LA液體培養(yǎng)基中搖菌7～8小時，然后離心收集沉淀，然后在加入新鮮的LA液體培養(yǎng)基和甘油，混勻，-70保存就好了

謝謝各位！

回復(fù)

搖菌后，直接加10%-50%甘油-70保存就行了

回復(fù)

搖菌后，直接加10%-50%甘油-70保存就行了

回復(fù)

菌種保藏的一般方法

一、菌種保藏意義及保藏機構(gòu)簡介菌種是一個國家所擁有的重要生物資源，菌種保藏（preservation）是一項重要的微生物學(xué)基礎(chǔ)工作。菌種保藏機構(gòu)的任務(wù)是在廣泛收集實驗室和生產(chǎn)菌種、菌株（包括病毒株甚至動、植物細(xì)胞株和質(zhì)粒等）的基礎(chǔ)上，將它們妥善保藏，使之達(dá)到不死、不衰、不亂以及便于研究、交換和使用的目的。為此，在國際上一些工業(yè)較發(fā)達(dá)的國家中都設(shè)有相應(yīng)的菌種保藏機構(gòu)。例如：中國微生物菌種保藏委員會（CCCCM），美國典型菌種保藏中心（ATCC），美國的“北部地區(qū)研究實驗室”（NRRL），荷蘭的霉菌中心保藏所（CBS），英國的國家典型菌種保藏所（NCTC），蘇聯(lián)的全蘇微生物保藏所（UCM）以及***的大阪發(fā)酵研究所（IFO）等都是有關(guān)國家有代表性的菌種保藏機構(gòu)。

二、菌種保藏的原理簡介菌種保藏的具體方法很多，原理卻大同小異。首先要挑選典型菌種（typeculture）的優(yōu)良純種，最好采用它們的休眠體（如分生孢子、芽孢等）；其次，還要創(chuàng)造一個適合其長期休眠的環(huán)境條件，諸如干燥、低溫、缺氧、避光、缺乏營養(yǎng)以及添加保護(hù)劑或酸度中和劑等。水分對生化反應(yīng)和一切生命活動至關(guān)重要，因此，干燥尤其是深度干燥，在保藏中占有首要地位就不言而喻了。五氧化二磷、無水氯化鈣和硅膠是良好的干燥劑，當(dāng)然，高度真空還可同時達(dá)到驅(qū)氧和深度干燥的雙重目的。除水分外，低溫乃是保藏中的另一重要條件。微生物生長的溫度低限約在-30℃，可是，在水溶液中能進(jìn)行酶促反應(yīng)的溫度低限則在-140℃左右。這或許就是為什么在有水分的條件下，即使把微生物保藏在較低的溫度下，還是難以較長期地保藏它們的一個主要原因。在低溫保藏中，細(xì)胞體積較大者一般要比較小者對低溫更為敏感，而無細(xì)胞壁(cellwall)者則比有細(xì)胞壁(cellwall)者敏感。其原因同低溫會使細(xì)胞內(nèi)的水分形成冰晶，從而引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)尤其是細(xì)胞膜的損傷有關(guān)。如果放到低溫（不是一般冰箱）下進(jìn)行冷凍時，適當(dāng)采用速凍的方法，可因產(chǎn)生的冰晶小而可減少對細(xì)胞的損傷。當(dāng)從低溫下移出并開始升溫時，冰晶又會長大，故快速升溫也可減少對細(xì)胞的損傷。當(dāng)然，不同微生物的最適冷凍速度和升溫速度也是不同的。例如，酵母的冷凍速度以每分鐘10℃為宜，而紅細(xì)胞則相應(yīng)地為2000℃。冷凍時的介質(zhì)對細(xì)胞損傷與否也有顯著的影響。例如，0.5mol／L左右的甘油或二甲亞砜可透入細(xì)胞，并通過降低強烈的脫水作用而保護(hù)細(xì)胞；大分子物質(zhì)如糊精、血清白蛋白、脫脂牛奶或聚乙烯吡咯烷酮（PVP）雖不能透入細(xì)胞，但可能是通過與細(xì)胞表面結(jié)合的方式而防止細(xì)胞膜受凍傷。在實踐中，發(fā)現(xiàn)用較低的溫度進(jìn)行保藏時效果更為理想，如液氮溫度（-195℃）比干冰溫度（-70℃）好，-70℃又比-20℃好，而-20℃則比4℃好。一種良好的保藏方法，首先應(yīng)能保持原菌的優(yōu)良性狀不變，同時還須考慮方法的通用性和操作的簡便性。具體的菌種保藏方法很多，其原理和應(yīng)用范圍各有側(cè)重，優(yōu)缺點也有所差別，現(xiàn)將其歸納如下：

三、目前所用的菌種主要保存方法簡介1、傳代培養(yǎng)保藏法；2、液體石蠟覆蓋保藏法；3、載體保藏法；4、寄主保藏法；

5、冷凍保藏法：液氮冷凍保藏法；6、冷凍干燥保藏法。

回復(fù)

基因工程(GeneticEngineering)菌的保藏方法

一、提供經(jīng)典的菌種保存方法，供學(xué)習(xí)與交流。

1.短期保存菌種，使用瓊脂穿刺即可，也為菌種的運輸提供方便。

2.若長期保存，深低溫保藏方法（cryopreservation)較好,特別是對于那些攜帶有不穩(wěn)定行狀（如質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座插入子和重復(fù)子）的基因工程(GeneticEngineering)菌株來說，更是如此。保存的菌種，復(fù)蘇時需注意：確保冷凍的培養(yǎng)物不融化，用這種方法儲存的菌種可被傳代培養(yǎng)和存活幾十年。如果超低溫冰箱發(fā)生故障，只要把菌種放入另一個超低溫冰箱儲存即可。盡管存活數(shù)會減少，但是大部分菌株都可耐受幾次反復(fù)凍融。一些實驗室使用70%的DMSO為冷凍保護(hù)劑，大多數(shù)實驗室還是喜歡使用甘油。30%的滅菌甘油與培養(yǎng)好的菌懸液按照1：1的比例混合，分裝到1.5ML的離心管中，每關(guān)1ML，存于--20度，但僅保存半年就不太好了，最好保存到——70度的低溫冰箱中。也可用10%的滅菌甘油從斜面上洗下保存

3.菌懸液中加甘露醇和人血白蛋白

以上就是關(guān)于菌種保存的相關(guān)介紹，首先將要保藏的菌種制成菌懸液備用；其次，準(zhǔn)備安瓿瓶，每瓶加入0.8毫升冷凍保護(hù)劑10%(體積比)甘油蒸餾水溶液，塞棉塞滅菌(1公斤/平方厘米，5分鐘)。內(nèi)容來源于互聯(lián)網(wǎng)，信息真?zhèn)涡枳孕斜鎰e。如有侵權(quán)請聯(lián)系刪除。